□張國紅 張瀝引（四川綿陽國紅動物醫(yī)院）

鄧遠(yuǎn)明（四川梓潼縣文昌鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站）

豬圓環(huán)病毒病研究與綜合防控策略

□張國紅 張瀝引（四川綿陽國紅動物醫(yī)院）

鄧遠(yuǎn)明（四川梓潼縣文昌鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站）

（接上期）

5 公共衛(wèi)生安全意義與疫苗研究

Mauro等指出：人的TT病毒（TTV，一種肝炎病毒）與其他動物圓環(huán)病毒有很多特異的型，尤其是雞貧血病毒（CAV）。目前盡管只有一個學(xué)者報道過在給肝炎（非AG型）患者輸血后，能分離出TTV，該病毒也屬于動物圓環(huán)病毒屬，并且在該病例中檢測出了豬圓環(huán)病毒（PCV）抗體。由于該病毒很廣泛地存在于豬體內(nèi)，人和豬在環(huán)境接觸、食物鏈關(guān)系等方面聯(lián)系非常緊密，況且近年來不斷出現(xiàn)的具有重大公共衛(wèi)生意義的人獸共患病 （如SRRS、豬鏈球菌病、禽流感和人流感等）的暴發(fā)與流行，使人們有理由擔(dān)心PCV和TTV在公共衛(wèi)生意義上的聯(lián)系。另外，隨著基因治療、器官移植等現(xiàn)代手段的需要和發(fā)展，因豬和人的親源關(guān)系很近，器官大小和人匹配，于是人們提出以豬為研究模型和對象，將來應(yīng)用經(jīng)基因改造的豬器官移植到人體內(nèi)。這一科學(xué)思路如果將人和動物的傳染病醫(yī)學(xué)專家排除在外，有可能引起人類感染包括PCV在內(nèi)的很多新的傳染病，這是我們都應(yīng)該關(guān)注的問題。

自該病在我國報道以來，其免疫學(xué)及生物制品學(xué)方面的研究和探索很快成為一個熱點。我國開展的研究主要包括以下幾方面：

5.1 桿狀病毒載體疫苗的研制。2005年，劉長明等將豬圓環(huán)病毒2型的ORF2在昆蟲桿狀病毒中進(jìn)行了表達(dá)，該重組蛋白具有良好的免疫活性反應(yīng)。昆蟲細(xì)胞系表達(dá)系統(tǒng)要取得最佳的結(jié)果，必須有優(yōu)質(zhì)的培養(yǎng)介質(zhì)和條件，對氧的需求量很大，大規(guī)模生產(chǎn)中必須攪拌，但攪拌過程又可能對細(xì)胞造成很大的壓力。該系統(tǒng)無法進(jìn)行連續(xù)性表達(dá)，糖基化方式與哺乳動物細(xì)胞存在一定差異，糖側(cè)鏈甘露糖的成分較高，而復(fù)合寡糖缺乏，且糖蛋白的糖鏈結(jié)構(gòu)多為簡單的不分支結(jié)構(gòu)，此外，宿主細(xì)胞生長慢，培養(yǎng)基昂貴。

5.2 偽狂犬病毒載體疫苗的研制。琚春梅等對表達(dá)了豬圓環(huán)病毒2型ORF2蛋白的重組為狂犬病病毒進(jìn)行了生物學(xué)特性的研究，結(jié)果表明該重組病毒具有良好的遺傳穩(wěn)定性，能誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答，并對強毒的攻擊具有一定的保護(hù)作用。

5.3 痘病毒載體疫苗的研制。金寧一等對 PCV2核酸疫苗和痘病毒載體表達(dá)PCV2 ORF2的亞單位疫苗作了比較，發(fā)現(xiàn)痘病毒載體表達(dá)系統(tǒng)制備的亞單位疫苗比核酸疫苗抑制PCV2病毒復(fù)制的效果要好，在臨床試驗中能使豬抵抗PCV2的攻擊。

5.4 腺病毒載體疫苗的研制。王先煒等構(gòu)建了含有豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白的重組腺病毒，為研制PCV2重組腺病毒基因工程疫苗進(jìn)行了探索。

5.5 嵌合病毒的研制。劉新文等構(gòu)建了具有感染性的嵌合豬圓環(huán)病毒PCV2-1，該重組病毒有望成為圓環(huán)病毒疫苗的候選株。

5.6 核酸疫苗的研制。金寧一等構(gòu)建了豬圓環(huán)病毒2型核酸疫苗，該疫苗能誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生良好的細(xì)胞免疫和體液免疫。

目前，一些國家已經(jīng)研制出商品化的疫苗用于豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）的防治，主要包括滅活疫苗、重組疫苗、DNA疫苗及嵌合病毒疫苗等。

我國國內(nèi)也已有自主研發(fā)的豬圓環(huán)病毒滅活疫苗，如豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗SH株、豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗LG株和豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗DBN-SX07株上市。豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗LG株由哈爾濱獸醫(yī)研究所研制，該產(chǎn)品以豬圓環(huán)病毒2型遺傳標(biāo)記毒株LG株為毒種，經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)傳代，優(yōu)化了病毒增殖條件，由獲得較高效價的病毒培養(yǎng)物制備而成。該產(chǎn)品采用的ISA15V佐劑屬于水包油劑型，可刺激接種動物產(chǎn)生快速免疫應(yīng)答反應(yīng)，抗體效價高、持續(xù)時間長。豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗SH株是以南京農(nóng)業(yè)大學(xué)為主要研發(fā)單位研究開發(fā)的，以PCV2分離株SH株接種PK15-B1克隆細(xì)胞制備抗原，濃縮后，經(jīng)甲醛溶液滅活，與礦物油佐劑混合乳化制備而成。豬圓環(huán)病毒 2型滅活疫苗DBN-SH07株是由北京大北農(nóng)集團研究開發(fā)的，以PCV2分離株DBN-SH07株接種敏感細(xì)胞株P(guān)K-15A培養(yǎng)，收獲細(xì)胞培養(yǎng)物，經(jīng)β-丙酰內(nèi)酯滅活后，與礦物油佐劑混合乳化制備而成。上述3種獲準(zhǔn)生產(chǎn)的疫苗均為常規(guī)滅活疫苗。

6 綜合防制措施

世界各國目前控制本病的經(jīng)驗證明，對共同感染源作適當(dāng)?shù)闹鲃用庖吆捅粍用庖邔τ诒静∮忻黠@的效果。選擇性的預(yù)防性投藥和治療，對控制細(xì)菌性的混合感染或繼發(fā)感染，同樣有效。但是至今對PCV2引起的相關(guān)疾病的病原和致病機制尚未完全了解，因此，還不能完全依賴特異性防制措施，只有同時結(jié)合良好的飼養(yǎng)管理，才能更好的控制疾病的發(fā)生。

在PCV2的防治中，有人嘗試過用血清療法，可達(dá)到一定的效果。其方法是采集本場育肥豬的血清，注射給斷奶仔豬，一般采用腹腔注射。此法必須考慮供血者的選擇、血清處理、血清貯存及注射方法等，并且只能在本場豬中采集血清。此外，也有通過“感染”物質(zhì)的主動免疫來防制本病的報道。所謂的“感染”物質(zhì)，通常是指本場感染豬的糞便、死產(chǎn)胎豬及木乃伊胎等，通過用這種“感染”物質(zhì)對母豬，特別是初產(chǎn)母豬在配種前飼喂，能收到較好的效果。若對有一定抗體的母豬在妊娠80天后再作補充飼喂，則可產(chǎn)生高水平的免疫反應(yīng)，并通過初乳傳給仔豬。這種方法不僅對防制本病有效，而且對其他腸道病毒引起的繁殖障礙也有較好的效果。

此外，良好的飼養(yǎng)管理對于本病的防制至關(guān)重要。在這方面，應(yīng)注意以下幾個問題：首先，對病豬進(jìn)行隔離飼養(yǎng)，嚴(yán)重感染豬可進(jìn)行撲殺、焚燒等，以清除傳染源。其次，要減少豬的應(yīng)激。過早斷奶、斷奶后更換飼料及斷奶后并窩并群都易造成豬的應(yīng)激，因此，建議在有此病存在的豬場，仔豬斷奶的日齡可以延遲至28天或35天，斷奶后要繼續(xù)飼喂斷奶前的飼料至少l0天，對于斷奶后的仔豬應(yīng)采用小群或小欄原窩原群飼養(yǎng)，小欄間要有實體隔墻，這樣可以減少相互間的爭斗，并減少窩與窩之間的水平傳播。過早或多次的疫苗注射也可引起免疫刺激及豬的免疫應(yīng)激，從而促使仔豬產(chǎn)生臨床癥狀，因而必須按照豬場或周邊的疫病情況合理制定免疫程序，避免過早或多次對仔豬進(jìn)行免疫。此外，降低飼養(yǎng)密度，注意通風(fēng)和保暖，為豬群營造舒適的環(huán)境對減少疾病的發(fā)生亦相當(dāng)重要。最后，要強化豬場的生物安全。豬場的生物安全不但要使用于豬場與外界之間，而且還要使用于豬場內(nèi)部，即豬舍與豬舍之間。在豬場與外界之間，應(yīng)減少后備母豬的購入數(shù)量。英國的一項調(diào)查認(rèn)為，母豬的高更新率可能是造成豬圓環(huán)病毒相關(guān)疾病的一個危險因子，由于健康狀態(tài)來源不同的種豬，其免疫力各不相同，造成豬群不穩(wěn)定的免疫狀態(tài)，而且大量引入種豬，有可能帶入某種疾病，一旦發(fā)生某種疫病，可能造成豬圓環(huán)病毒相關(guān)疾病的加重或暴發(fā)。此外，斷奶豬舍在進(jìn)豬前必須嚴(yán)格清洗消毒，同時執(zhí)行全進(jìn)全出的飼養(yǎng)制度。在每個豬舍的入口處必須設(shè)計消毒池，飼養(yǎng)人員在進(jìn)入前必須消毒。

6.1 Madec黃金法則

法國Madec等人進(jìn)行了大規(guī)模豬場試驗，其結(jié)果說明，環(huán)境控制方面嚴(yán)格完善的衛(wèi)生措施對疾病控制有很高的價值。關(guān)于這些措施，Madec在2001年中期總結(jié)出了20條要點，后來在生產(chǎn)上歸納出了四條黃金法則（見下表），這對PCV的防治提供了一個可以借鑒的藍(lán)本。

Madec的黃金法則

6.2 提供良好的飼養(yǎng)條件與措施

3周齡仔豬圈舍溫度為28℃，每隔一周調(diào)低2℃，直至常溫；批與批之間不混群。斷乳期：豬圈小，原則上一窩一圈，豬圈分隔堅固；堅持嚴(yán)格的全進(jìn)全出，并有與鄰舍分割的獨立糞尿排出系統(tǒng)；降低飼養(yǎng)密度（＞0.33平方米/仔豬）；增加喂料器空間（＞7厘米/仔豬）；改善空氣質(zhì)量（氨氣＜10× 10-6）， 二氧化碳 （＜0.1%）,相對濕度（＜85%）；豬舍溫度要適度。生長育肥期：豬圈小，壁式分隔；堅持嚴(yán)格的全進(jìn)全出、空欄、清洗和消毒制度；從斷奶后豬圈移出的豬不混群；整個育肥圈豬不再混群；降低飼養(yǎng)密度（＞0.75平方米/豬）；改善空氣質(zhì)量和保持圈舍溫度。保育舍要有獨立飲水和加藥設(shè)施；嚴(yán)格的保健措施（斷尾、斷齒、注射時，嚴(yán)格消毒等）。將病豬及早移到隔離舍治療或撲殺。

仔豬斷奶后3～4周是預(yù)防豬圓環(huán)病毒病的關(guān)鍵時期。因此，最有效的方法和措施是盡可能減少對斷奶仔豬的刺激。避免過早斷奶和斷奶后更換飼料，并在斷奶前后的飼料中添加適當(dāng)?shù)膹?fù)合多維、維生素和葡萄糖。斷奶后要繼續(xù)飼喂斷奶前的飼料至少10天。避免斷奶后并窩并群；避免在斷奶前后1周內(nèi)多次注射疫苗；降低飼養(yǎng)密度，減少應(yīng)激反應(yīng)，為仔豬提供舒適的環(huán)境。

6.3 適宜的疫苗接種

做好豬瘟、豬藍(lán)耳病、豬細(xì)小病毒病、喘氣病等疫苗的免疫接種工作。目前還沒有有效的疫苗可以用來預(yù)防PCV的感染。雖然國內(nèi)外已研制出基因工程苗、亞單位疫苗，但因PMWS并非僅由PCV引起, PCV-2的共同感染源很多，發(fā)病豬場首先要確定自身的共同感染源，并應(yīng)用相應(yīng)的疫苗對母豬實施合適的免疫，對確保妊娠期胎兒和哺乳仔豬的安全相當(dāng)重要，與此同時，通過病原檢測確定母源抗體消失后的仔豬和育成豬的共同感染源，采用合適的疫苗和藥物防治，才能收到應(yīng)有的效果。

近年來，在PCV2相關(guān)疾病的疫苗研究方面，許多學(xué)者進(jìn)行了有益的探索。目前，有關(guān)該病的疫苗研究僅限于全病毒滅活疫苗、DNA疫苗、PCV1-PCV2重組疫苗及Cap蛋白基因工程亞單位疫苗，并取得重要研究進(jìn)展。疫苗免疫作為防控PCV-2的主要手段，國內(nèi)外研究者正在著力研究與開發(fā)各種PCV-2疫苗。國內(nèi)多家獸用生物制品制造企業(yè)已有PCV-2滅活疫苗與亞單位疫苗注冊上市，這些疫苗對我國PCV-2的控制發(fā)揮了巨大的作用。

6.4 綜合抗感染防治

我們不主張飼養(yǎng)者把精力放在治療上，因為某一種單一的治療方法均不能獲得顯效，用抗生素治療豬圓環(huán)病毒病無太大的效果，僅能減少繼發(fā)性的細(xì)菌感染。但在實踐中，采用定期保健和有序的疫苗免疫，可較好控制本病的發(fā)生。

6.4.1 群體防治

仔豬用藥：哺乳仔豬在3、7、21日齡各注射一次賽利健10毫升+血爾康20毫升（兩者混合后按0.2毫升/千克體重肌注）；斷奶前1周至斷奶后1周，在每1000千克飼料中添加 阿克舒1千克 （主要成分：阿莫西林+克拉維酸鉀）+替服欣（主要成分：替米考星）1千克+速克（主要成分：紫錐菊提取物、金絲桃素），斷奶前后各飼喂1周。

母豬用藥：在母豬產(chǎn)前1周和產(chǎn)后1周，在每1000千克飼料中添加圓藍(lán)口炎消（主要成分：黃連、黃芩、板藍(lán)根、連翹等）2千克及多西福（主要成分：多西環(huán)素、蜂膠）1千克進(jìn)行飼喂。

6.4.2 個體治療

6.4.2.1 混合型感染

第一天：上午葡甲胺10毫升+金炮筒10毫升+雙黃連10毫升，混合，按 0.4毫升/千克體重肌肉注射；下午博導(dǎo)1號注射液10毫升+豬白細(xì)胞干擾素8萬國際單位，混合，按0.2毫升/千克體重注射。

第二天：上午特級頭孢5毫升+大力神10毫升，混合，按0.2毫升/千克體重注射；下午博導(dǎo)1號注射液10毫升+豬白細(xì)胞干擾素8萬國際單位，混合，按0.2毫升/千克體重注射。

第三天：上午紅氟5毫升+攻克鏈紅10毫升，混合，按0.2毫升/千克體重注射；下午博導(dǎo)1號注射液10毫升+豬白細(xì)胞干擾素8萬國際單位，混合，按0.2毫升/千克體重注射。

6.4.2.2 皮炎腎病綜合征

聚能核肽（轉(zhuǎn)移因子）10毫升+九菌敗毒針（魚腥草提取物）20毫升,混合，按0.2毫升/千克體重肌肉注射，另一側(cè)按0.2毫升/千克體重肌肉注射百草神針（板藍(lán)根），每日一次，連用三日。

6.4.2.3 圓環(huán)呼吸與多系統(tǒng)衰竭綜合征巨能1號（白細(xì)胞介素）按0.2毫升/千克體重肌肉注射，另一側(cè)按0.1毫升/千克體重肌肉注射金泰妙（泰妙菌素），每日一次，連用三日。

6.4.2.4 增生性腸炎

高免肽血清（黃芪提取物）10毫升+百草神針 （穿心蓮提取物）10毫升,混合，按0.4毫升/千克體重肌肉注射，另一側(cè)賽利?。}酸頭孢噻呋）10毫升+痢炎雙殺（大蒜苦參提取物+抗菌肽），混合，按0.2毫升/千克體重肌肉注射，一日一次，連用三次。

6.4.3 中獸醫(yī)辯證

圓環(huán)病毒感染在中獸醫(yī)學(xué)領(lǐng)域應(yīng)歸屬于瘟疫范疇。瘟疫為感受異氣（疫氣、雜氣、戾氣、癘氣），病邪從口鼻侵入動物機體而發(fā)病。在伏邪理論中，闡述病邪潛伏的機理時，常認(rèn)為邪氣伏匿于某特殊部位，這個特殊的部位就是膜原。膜原為瘟疫的主要病位中心，邪伏膜原，如鳥棲巢，如獸藏穴，營衛(wèi)所不關(guān)，藥石所不及。膜原與腠理互為表里，與玄府相關(guān)為用，邪伏膜原，必然影響到玄府腠理。玄府腠理閉郁，氣液不步，營衛(wèi)受傷，氣血不暢，痰濁瘀血內(nèi)生，損傷臟腑，即邪氣盤踞于膜原，內(nèi)外隔絕，表氣不能通于內(nèi)，里氣不能通于外。治療瘟疫，應(yīng)避疫邪猖獗之勢，宜疏達(dá)膜原，開通玄府，使毒邪潰退，讓邪氣分離膜原。邪毒即離膜原，乃觀其變，或出表，或入里，然后可導(dǎo)邪而去，邪盡方愈。邪離膜原，當(dāng)導(dǎo)邪外出，同樣要開通玄府郁結(jié)，暢通邪氣的出路，疏利氣機，因勢利導(dǎo)，邪盡則病愈。

瘟疫為感受溫?zé)嵋叨静⌒八拢?qū)逐疫邪，清熱解毒，其前提是開通玄府，未有玄府郁結(jié)而熱能清、毒能解。所以，開通玄府，疏利宣導(dǎo)，暢達(dá)氣機，透達(dá)伏邪為治療瘟疫的原則。透、泄為瘟疫的主要治法。透、泄的目的是暢通出路，從腠理、玄府、諸竅達(dá)邪外出。凡治病，總宜使邪有出路，宜下出者，不泄之不得下也；宜外出者，不散之不得外也。邪既入，則以逐穢為第一要義。上焦如霧，升而逐之，兼以解毒；中焦如漚，疏而逐之，兼以解毒；下焦如瀆，決而逐之，兼以解毒。

透重在向外疏透，開通玄府，暢達(dá)氣機，達(dá)邪外出。有言：治病透字最為先，不得透字總不沾，在表宜透發(fā)，在里宜透穿。泄重在通泄六腑，六腑通則玄府亦通，又以通泄陽明為要，假大腸為去路，導(dǎo)邪外出，一竅通而百竅通也。

處方一：黃芪 150克、黃芩100克、板藍(lán)根 70克、黨參60克、茵陳50克、檳榔100克、金銀花80克、連翹80克、厚樸80克、草果50克、甘草30克,每次煎水1000毫升，煎熬1小時，共煎3次，合并煎液濃縮至1500毫升,每千克體重口服0.5毫升，每天1次，連用3天。

處方二：荊芥150克、陳皮 150克、檳榔120克、杏仁200克、干姜100克、半夏100克、苦參60克、板藍(lán)根70克、紫花地丁70克、穿心蓮60克、桔梗80克、厚樸80克、草果50克,將所述原料藥材混合后粉碎,每次煎水2000毫升，煎熬1小時，共煎3次，合并煎液濃縮至3000毫升,加酒精2000毫升，靜置48小時后取上清液，回收酒精后得藥液1500毫升,每千克體重口服0.2毫升，每天1次，連用3天。本方具有清熱解毒、瀉火通便、扶正祛邪、消腫散癰功能，對豬圓環(huán)病毒病引致的皮炎腎病綜合征和肺炎綜合征具有良好的治療作用。

處方三：對圓環(huán)病毒引致的增生性腸炎獸醫(yī)學(xué)認(rèn)為，此類腹瀉多由外感穢濁時邪，疫毒之氣入里生濕發(fā)熱而致，故有濕勝者瀉之說。邪氣入里，濕熱內(nèi)勝，脾不運濕，則泄瀉。穢濁之氣擾亂胃氣，胃氣上逆，出現(xiàn)嘔吐。糞呈黃色或灰白色，舌紅、脈數(shù)、苔膩均為濕熱之象。方劑：黨參 150克、土炒白術(shù)200克、干姜150克、甘草100克、茯苓200克、澤瀉100克、桂枝100克、厚樸120克、草果60克、檳榔80克。水煎3次，得濾液3000毫升，每千克體重口服0.2毫升，每天1次，連用3天。